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在單克隆抗體藥物的純化過(guò)程中，以蛋白A（Protein A）為基礎(chǔ)的親合層析是廣泛應(yīng)用的純化方法之一，單克隆抗體可以有效的在此步驟中得到純化。蛋白A 的最初來(lái)源是細(xì)菌（Staphylococcus aureus）細(xì)胞壁中的一個(gè)蛋白質(zhì)，研究表明蛋白A 可能對(duì)人體有潛在的危害，它的生物學(xué)作用包括刺激人體多種細(xì)胞素（IFNγ, TNFα, IL-1α,IL-1β, IL-2, IL-4）的釋放。由于在蛋白A 親合層析柱使用過(guò)程中會(huì)有微量的蛋白A 從層析柱上脫落下來(lái)，因此用靈敏的方法來(lái)確證單克隆抗體藥物中蛋白A 的殘留處于一個(gè)較低的和穩(wěn)定的水平是單克隆抗體藥物的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)之一。
蛋白A (Protein A) 酶聯(lián)檢測(cè)試劑盒是用來(lái)定量分析生物藥物中蛋白A雜質(zhì)的試劑盒。首先，用不同濃度的蛋白A標(biāo)準(zhǔn)蛋白制作一條標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，然后再根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)來(lái)分析生物藥物中殘留蛋白A的含量。具體方法為：先將蛋白A標(biāo)準(zhǔn)蛋白或者待測(cè)樣品適當(dāng)稀釋后加入已包被好抗蛋白A抗體的96孔平板中。經(jīng)過(guò)1.5小時(shí)的保溫，蛋白A與已經(jīng)固定在平板上的抗體結(jié)合形成抗原－抗體復(fù)合物。此復(fù)合物被隨后加入的生物素標(biāo)記的抗蛋白A的抗體結(jié)合并進(jìn)一步形成更高級(jí)的復(fù)合物，反應(yīng)45分鐘后洗去未結(jié)合的物質(zhì)。再加入鏈霉親合素-辣根過(guò)氧化物酶復(fù)合物（Streptavidin-HRP Conjugate），靜置30分鐘。因鏈霉親合素可以與任何帶生物素標(biāo)記的抗體相結(jié)合，從而使鏈霉親合素-辣根過(guò)氧化物酶復(fù)合物連接到平板上。接下來(lái)沖洗掉未結(jié)合的物質(zhì)，加入TMB底物。固相上的酶催化底物產(chǎn)生顏色反應(yīng)，待顏色反應(yīng)一段時(shí)間后，終止反應(yīng)。用酶標(biāo)儀在450 nm波長(zhǎng)下測(cè)定其結(jié)果，此結(jié)果能間接地反應(yīng)結(jié)合到平板上的蛋白A數(shù)量的多少。根據(jù)蛋白A標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)定量分析生物藥物中殘留蛋白A的含量。