熒光定量PCR儀?（qPCR儀）是一種用于實時監(jiān)測DNA擴(kuò)增過程的高精度分子生物學(xué)設(shè)備，廣泛應(yīng)用于基因表達(dá)分析、病原體檢測、物種鑒定、SNP基因分型和轉(zhuǎn)基因鑒定等領(lǐng)域。
二手熒光定量PCR儀是否需要維修，可通過系統(tǒng)性觀察運(yùn)行狀態(tài)、驗證關(guān)鍵性能指標(biāo)和排查常見故障表現(xiàn)來綜合判斷?。
1. 熔解曲線是否均一？
大家通常有一個誤區(qū)就是看升溫降溫的速率來判斷溫控的好壞，比如快速升溫10C/min以上。其實這是沒有意義的，因為您的PCR管內(nèi)的液體試劑根本達(dá)不到這個升溫速率。實際真正需要考慮的是各個Peltier的溫控片是否溫度一致，或者控制Peltier的電路板在計算溫度的數(shù)據(jù)處理是否結(jié)果接近。 通常，我們使用同樣的試劑在加熱模塊的不同位置進(jìn)行染料法擴(kuò)增，隨后獲得的Tm值是否接近？一般來說，全新的qPCR儀獲得Tm值誤差應(yīng)在±0.3℃以內(nèi)。對于二手qPCR儀，Tm值的誤差會大一點，但應(yīng)在±0.5℃以內(nèi)。 誤差大于±0.5℃的qPCR儀是不合格的。 這類二手機(jī)是需要檢查維修，找出Tm值誤差大的原因。
2. Ct值是否均一？
對于不同peltier片的相同試劑需要測試Ct值是否有誤差。通常qPCR儀獲得Ct值誤差應(yīng)在±0.3以內(nèi)。二手機(jī)畢竟不是新機(jī)，可以把Ct值誤差放寬到大于±0.5。Ct值誤差大于±0.5的qPCR儀是不合格的，需要進(jìn)一步檢測光路或加熱模塊來維修。Ct值誤差大的機(jī)器是無法通過RNase P板驗證的。很多人認(rèn)為測加熱模塊的每個孔溫度誤差就可以確保qPCR儀的好快，這其實是個誤區(qū)，因為加熱模塊的溫度均一不代表你可以獲得均一的Ct值。相反，RNase P板驗證合格是必須加熱模塊溫度均一，同時熒光光路正常，并且機(jī)器的數(shù)據(jù)處理是正常的。因此有條件的客戶，應(yīng)該對二手qPCR儀進(jìn)行RNase P板的現(xiàn)場驗證。
3. 長時間開機(jī)是否穩(wěn)定？
二手機(jī)的常見故障是機(jī)器不穩(wěn)定，因此偶爾跑一次實驗正常不能說明機(jī)器是正常的。 實際上，要避免二手qPCR儀不出錯幾乎是不可能。 我們只能從概率上去減少機(jī)器不穩(wěn)定的可能。因此，建議二手機(jī)需要連續(xù)運(yùn)行3天，每天連續(xù)運(yùn)行3-4次實驗。如果這樣運(yùn)行正常，大概率這臺二手機(jī)是穩(wěn)定的。
4. 運(yùn)行出現(xiàn)報錯碼
這屬于硬故障，用戶至需要把對應(yīng)的報錯信息和報錯碼提供給維修方即可。值得注意的是，報錯的內(nèi)容是一個錯誤結(jié)果，并非故障的原因，因此故障仍需排查的。
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